慢病毒载体介导的dbpA基因沉默对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNA结合蛋白dbpA基因对大肠癌细胞生物学行为的影响.方法 实验分为3组:siRNA-dbpA慢病毒干扰组、非特异性序列组和空白对照组.制备siRNA-dbpA慢病毒表达载体,转染SW620后,采用RT-PCR法对细胞中dbpA mRNA表达水平进行分析,Western blot检测SW620细胞的dbpA蛋白表达水平.采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,并检测细胞克隆形成能力.通过裸鼠移植瘤实验观察沉默dbpA后SW620细胞在体内成瘤能力.结果 siRNA-dbpA显著下调了SW620细胞中dbpA的表达,所构建的重组慢病毒有较高的基因沉默效率.siRNA-dbpA组的dbpA表达水平下调.各组的细胞凋亡率分别为26.6％±0.38％、12.54％±0.25％和4.46％±0.19％,siRNA-dbpA组高于其他两组,差异有统计学意义(F =28.159,P＜0.01);各组的细胞增殖第5天吸光度值分别为(0.194±0.037)、(0.814 ±0.043)、(1.625±0.061),siRNA-dbpA组低于其他两组,差异有统计学意义(F =23.214,P＜0.01);细胞克隆数分别为(37±3)、(64±5)和(175±10)个,siRNA-dbpA组低于其他两组,差异有统计学意义(F=40.254,P＜0.01).siRNA-dbpA组裸鼠移植瘤体积在14、21、35 d后与非特异性序列组和空白对照组相比差异均有统计学意义(F=38.256、40.241、30.257,均P＜0.05).结论 以dbpA为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株SW620中的dbpA表达,显著增加细胞的凋亡,降低了细胞的增殖克隆能力.dbpA沉默后对活体肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用.