脑心肌炎病毒鉴定方法的初步研究

目的 摸索建立脑心肌炎病毒(EMCV)鉴定方法.方法 根据GenBank中EMCVVR-129B序列设计引物,提取病毒RNA,进行RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳检测片段大小.将DNA测序结果与GenBank中相同毒株EMCV序列进行比对.以RK细胞培养的全病毒作为免疫原制备抗血清,用于建立间接免疫荧光试验(IIFA)及中和试验方法,并验证方法精密性和特异性.制备抗GST-VP1和抗GST-VP2多克隆抗体,与EMCV浓缩液进行免疫印迹反应.结果 获得的DNA片段与GenBank中上传的相同毒株EMCV序列进行比对,相似性为98％～100％.采用20100901批抗血清160倍稀释作为一抗,建立IIFA方法,特异性好.检测20100901批抗血清中和效价1∶30 211,建立的固定病毒-稀释血清中和试验方法特异性、精密性好.抗GST-VP1和GST-VP2抗体与EMCV浓缩液于相对分子质量为33×103左右分别出现清晰单一条带,与理论值相符.结论 初步建立了用于EMCV毒株鉴定的RT-PCR、间接免疫荧光、中和试验及免疫印迹方法.