磷酸肌醇4磷酸调控RhoA对人脑胶质瘤细胞U87侵袭迁移的作用

目的 通过过表达或沉默磷酸肌醇4磷酸(PI4P)在人脑胶质瘤细胞U87中,了解PI4P对人脑胶质瘤U87细胞侵袭迁移的影响,探索PI4P在人脑胶质瘤发展过程中的作用机制.方法 采用LV-Helper1、LV-Helper2、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-shPI4P包装pWPXLd-PI4P及pLL3.7-shPI4P慢病毒;pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scramble、pLL3.7-shPI4P慢病毒侵染U87细胞,构建U87-GFP(过表达PI4P细胞系对照组/A1组)、U87-GFP-PI4P(过表达PI4P细胞系实验组/A2组)、U87-Scramble(沉默PI4P细胞系对照组/B1组)、U87-shPI4P(沉默PI4P细胞系实验组/B2组)细胞系;应用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹实验检测PI4P及RhoA的表达水平.结果 成功包装了pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scramble、pLL3.7-shPI4P慢病毒;构建了U87-GFP(过表达PI4P细胞系对照组)、U87-GFP-PI4P(过表达PI4P细胞系实验组)、U87-Scramble(沉默PI4P细胞系对照组)、U87-shPI4P(沉默PI4P细胞系实验组)细胞系;过表达PI4P后,U87-GFP-PI4P细胞系侵袭个数为(197.69±2.08)个,而U87-GFP系侵袭个数为(120.00±2.64)个,迁移个数分别为(70.00±0.58)、(50.00±1.02)个;沉默PI4P后,U87-shPI4P细胞系及U87-Scramble细胞系的侵袭个数分别是(79.67±1.53)、(117.00±2.00),迁移个数分别为(19.33±2.08)、(46.67±1.52)个,过表达PI4P后侵袭迁移能力明显增强(t=39.960,P=0.000;t=33.150,P=0.000),沉默PI4P后,U87细胞侵袭迁移能力显著减弱(t=25.700,P=0.000;t=18.340,P=0.000);过表达PI4P后,RhoA表达水平升高(t=17.270,P=0.000),沉默PI4P后RhoA蛋白表达水平降低(t=35.120,P=0.000).结论 在人脑胶质瘤U87细胞中,PI4P通过调节RhoA蛋白表达水平,调节人脑胶质瘤U87细胞的侵袭迁移,为脑胶质瘤的基础研究及临床治疗提供新的研究及治疗靶点.