痘苗病毒VV1原核增强子样序列的克隆及其功能和应用研究

目的 从痘苗病毒基因组中克隆原核增强子样序列VV1,并对其结构、功能和应用进行研究.方法 采用氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,采用末端定向缺失试验对原核增强子样序列进行结构与功能研究,用携带增强子样序列表达载体表达干扰素基因.结果 从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到原核增强子样序列VV1,正反向分别可使lacZ基因活性提高10.9倍和3.8倍,末端定向缺失试验证实,5'末端20 bp的核苷酸序列和3'末端20 bp的核苷酸序列对于VV1的活性具有重要作用,因为缺失任意一个都会导致增强活性的大幅度下降.而5'末端30～50 bp的核苷酸序列对于保持VV1片段的基本活性非常重要,缺失它时VV1的活性完全消失.用携带VV1的表达载体表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性提高2.6倍.结论 从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到原核增强子样序列VV1,末端定向缺失试验证实VV1功能区,携带痘苗病毒增强子样序列VV1的表达载体可提高干扰素基因的表达水平.