草氨酸钠抑制乳酸脱氢酶对未分化甲状腺癌增殖的影响及其机制

目的 观察草氨酸钠作为乳酸脱氢酶(LDH)抑制剂对人未分化甲状腺癌(ATC)增殖的影响,探讨抑制LDH对未分化甲状腺癌的治疗作用.方法 免疫组织化学法检测乳酸脱氢酶a(LDHa)在12例ATC及癌旁组织的表达.噻唑蓝(MTT)法和平板克隆形成实验检测草氨酸钠对Hth83、SW1736细胞增殖的影响;乳酸脱氢酶试剂盒和乳酸检测试剂盒检测草氨酸钠对LDH活性及乳酸生成的影响.Western blot检测细胞增殖相关的通路蛋白的改变.结果 免疫组织化学检测显示LDHa蛋白在癌及其癌旁组织的阳性率分别为46.0％和14.1％,差异有统计学意义(P =0.004);0、5、10、20、40、60、80、100 mmol/L草氨酸钠作用于Hth83、SW1736后,MTT实验显示Hth83细胞组24、48、72 h时50％生长抑制浓度(IC50)分别是64.3、24.4、10.1 mmol/L;而SW1736细胞组其IC50值分别是82.5、51.2、25.3 mmol/L.克隆形成实验提示细胞克隆形成能力受到抑制,且抑制程度与药物浓度呈正相关(P =0.012).这种抑制作用同时伴有LDH活性的降低和乳酸生成的减少.进一步Western blot检测显示增殖相关通路蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、磷酸化糖原合成激酶3β (p-GSK-3β)表达量出现下调.结论 LDHa在甲状腺未分化癌组织中高表达,其酶活性抑制剂草氨酸钠可抑制ATC细胞Hth83、SW1736的增殖,其分子机制可能是通过抑制Akt-Cyclin D1蛋白通路实现的.