单分散大尺寸金纳米颗粒的可控制备及其应用于免疫层析法检测心肌肌钙蛋白Ⅰ

目的 可控制备不同直径的单分散胶体级金纳米颗粒(AuNPs),并将其应用于免疫层析法定性检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ),评估其检测效果.方法 以小尺寸AuNPs(15 nm)作为生长中心(种子),采用种子生长-热熟化法,成功地制备了四种单分散、大尺寸、柠檬酸钠稳定的胶体级AuNPs.作为对照,采用传统柠檬酸钠还原法,制备两种常规尺寸的AuNPs(20 nm、40 nm).六种尺寸AuNPs均标记鼠源cTnⅠ单克隆抗体,滴于聚酯结合垫上制成AuNPs结合物垫(金标垫),将与金标垫抗体配对的鼠源抗人cTnⅠ单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体分别包被检测线和质控线,组装成免疫层析试剂盒检测cTnⅠ,从试剂盒信号强度、灵敏度、特异性、稳定性方面对其进行评估.并将四种大尺寸AuNPs制作的试剂盒与常规尺寸AuNPs制作的试剂盒进行检测效果对比.选取四种大尺寸AuNPs制作的cTnⅠ免疫层析试剂盒中检测效果最佳者进行临床样本检测及与商品试剂盒做检测效果比对.结果 采用种子生长-热熟化法制备的大尺寸AuNPs直径分别为50 nm、65 nm、79 nm、102 nm,尺寸分布呈单分散性.四种大尺寸AuNPs制作的免疫层析试剂盒检测cTnⅠ,其信号强度优于采用20 nm AuNPs制作的试剂盒(均P＜0.01),65 nm的AuNPs制作的试剂盒其信号强度优于各尺寸试剂盒(均P＜0.01).其最低检测限为0.50 μg/L.应用65 nm的AuNPs制作的cTnⅠ试剂盒检测100份血清,与化学发光免疫分析法结果进行对比分析,阳性符合率为97.3％,阴性符合率为100.0％;其灵敏度及同一cTnⅠ标准品浓度下检测信号强度优于艾博公司和博天科智公司同类产品(均P＜0.01).结论 种子生长-热熟化法可控制备直径为50～100 nm单分散、大尺寸、柠檬酸钠稳定的AuNPs,使得各类大尺寸AuNPs免疫层析试剂盒的研发成为可能.直径为65 nm的AuNPs可作为cTnⅠ免疫层析试剂盒的新选择.