红色荧光蛋白标记蛋白激酶B的慢病毒构建和表达

目的 构建、包装并鉴定携带红色荧光蛋白(DsRed)标记的蛋白激酶B(akt1)的慢病毒.方法 通过逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)扩增1488 kb mouse akt1基因片段,通过TA克隆将akt1接入T载体,然后和IRES-dsred、pXZ208连接.酶切、测序鉴定正确的重组体(pXZ208-akt1-IRES-dsred).三质粒系统经磷酸钙法包装病毒,荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)检测病毒滴度.Western blot比较病毒感染组与未感染组AKT1蛋白表达.pXZ208-akt1-IRES-dsred慢病毒和绿色荧光蛋白标记(GFP)的慢病毒共感染真核细胞,荧光显微镜观察两者的表达.结果 经鉴定转移质粒构建正确,荧光显微镜观察293FT表达DsRed,FACS测得病毒滴度为(1.245±0.250)×107/ml.Western blot证实病毒感染组与未感染组比较AKT1蛋白表达增高(P＜0.05).与GFP标记的慢病毒共感染真核细胞,荧光显微镜观察到共同表达DsRed和GFP.结论 DsRed标记akt1慢病毒构建和表达成功.DsRed和GFP标记慢病毒共感染真核细胞可观察到表达两种荧光蛋白.