α-硫辛酸减轻6-羟基多巴胺诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的机制研究

目的 探讨α-硫辛酸(ALA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬功能的影响及可能机制. 方法 选用SH-SY5Y细胞株进行实验.共分为5组,分别是空白对照组(A组)、ALA组(B组)、6-OHDA组(C组)、ALA+6-OHDA组(D组)、雷帕霉素(RAPA)组(E组).测定A～D组的细胞活性、细胞凋亡率、氧化应激水平,测定A～E组的GFP-LC3质粒转染及免疫印迹(Western blot)检测各组自噬相关蛋白包括微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、腺嘌呤核糖核苷酸依赖的蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK (p-AMPK)、雷帕霉素的哺乳动物靶点(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达. 结果 与对照组相比,6-OHDA组的细胞活性降低(P＜0.01),细胞凋亡率升高(P＜0.01),氧化应激水平升高(P＜0.01),LC3-Ⅱ的表达升高(P＜0.05),其中6h时表达最高,p-AMPK的表达升高(P＜0.05),p-mTOR的表达降低(P＜0.05);与对照组相比,ALA组的上述指标均无明显变化;与6-OHDA组相比,ALA+ 6-OHDA组的细胞活性升高(P＜0.01),细胞凋亡率降低(P＜0.01)、氧化应激水平降低(P＜0.01),LC3-Ⅱ的表达降低(P＜0.05),p-AMPK的表达降低(P＜0.05),p-mTOR的表达升高(P＜0.05). 结论 6-OHDA诱导了SH-SY5Y细胞的氧化应激和自噬,降低了细胞活性;ALA通过抑制AMPK/mTOR通路介导的自噬减轻了6-OHDA诱导的细胞损伤.