氧化应激条件下多巴胺能细胞自噬的变化

目的 探讨多巴胺能神经元(PC12细胞)在氧化应激环境下细胞大自噬及分子伴侣介导的自噬的变化,以及其在神经元变性死亡中的作用. 方法 以不同浓度(20、100、500 nmol/L)鱼藤酮处理PC12细胞后,采用透射电镜方法观察PC12细胞内自噬体的形态学特点;通过单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色、免疫印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,以观察大自噬活性;通过免疫印迹法检测溶酶体相关膜蛋白2α (Lamp-2α)、热休克同源蛋白70 (Hsc70)和热休克蛋白90(Hsp90)的表达,以观察分子伴侣介导的自噬. 结果 电镜观察显示未处理的PC12细胞自噬活性低,较少观察到自噬泡出现;鱼藤酮处理组各种不同形态的自噬泡明显增多,可观察到自噬线粒体现象,其中高浓度(500 nmol/L)鱼藤酮组胞浆内出现了大量空泡状结构.MDC荧光染色显示经不同浓度鱼藤酮处理后,红色荧光逐渐增强,呈点状或团状分布.免疫印迹结果显示LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ的表达逐渐增加,呈剂量依赖性;Lamp-2α及Hsc70、Hsp90的表达亦明显增多,但在不同浓度鱼藤酮处理组间差异未出现统计学意义(P＞0.05). 结论 氧化应激条件下,PC12细胞内自噬活性被激活,可诱发自噬性细胞死亡的发生,其中大自噬活性的上调随着氧化应激程度加剧而不断上升,而分子伴侣介导的自噬活性则与氧化应激的程度无明显关系.