GRP78在七氟醚预处理抑制大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)在七氟醚预处理抑制大鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法 采用随机数字表法将培养的大鼠心肌细胞分5组(n=30),正常对照组(C组):细胞不经任何处理;缺氧复氧组(H/R组):细胞在95％N2-5％CO2混合气体中缺氧2h后放回95％空气-5％CO237℃培养箱内复氧lh;七氟醚预处理组(S组):细胞经2.5％七氟醚孵育20 min,洗脱10 min后进行缺氧复氧;siRNA-GRP78组:采用siRNA-GRP78 100 nmol/L转染心肌细胞,24 h后进行七氟醚预处理及缺氧复氧处理;siRNA对照组(siRNA组):采用随机序列核酸siRNA转染心肌细胞,其它处理同siRNA-GRP78组.各组处理结束后,采用Western blot法测定心肌细胞GRP78、胞浆和线粒体细胞色素c的表达;采用ELISA法测定培养液LDH和CK的活性;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Fura-2/AM钙离子荧光探针法测定细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i);采用荧光分光光度法测定线粒体膜通透性转运孔(mPTP)开放程度.结果 与C组比较,H/R组心肌细胞GRP78和胞浆细胞色素c表达上调,培养液LDH和CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i升高,线粒体细胞色素c表达下调(P＜0.01);与H/R组比较,S组心肌细胞GRP78和线粒体细胞色素c表达上调,培养液LDH和CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和mPTP开放程度降低,胞浆细胞色素c表达下调(P＜0.01),siRNA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,siRNA-GRP78组心肌细胞GRP78和线粒体细胞色素c表达下调,培养液LDH和CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和mPTP开放程度升高,胞浆细胞色素c表达上调(P＜0.01).结论 GRP78参与了七氟醚预处理抑制大鼠心肌细胞凋亡的作用,机制与维持细胞内Ca2+稳态,抑制mPTP开放有关.