Hedgehog蛋白对人视网膜微血管内皮细胞功能的影响及其可能的信号通路

目的 探讨Hedgehog蛋白对血-视网膜内屏障中人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)功能的影响及其可能的信号通路.方法 取在正常培养基中培养的HRMEC,分为正常对照组、0.5μmol/L激动剂组和1.0μmol/L激动剂组,分别加入终浓度为0、0.5和1.0μmol/L的Hedgehog激动剂purmorphamine;取高糖培养基中培养的HRMEC,分为高糖对照组、1.5μmol/L抑制剂组和2.5μmol/L抑制剂组,分别加入终浓度为0、1.5和2.5μmol/L的Smoothed抑制剂Erismodegib.采用MTS细胞增生实验和Transwell细胞迁移试验检测各组HRMEC增生A490值和相对迁移率.采用Western blot方法检测各组细胞鸟苷酸结合蛋白偶联受体(GPCRs)通路下游PLCγ1、Akt和Erk蛋白磷酸化水平变化.结果 高糖对照组细胞Hedgehog蛋白相对表达量为6.24±0.11,明显高于正常对照组的1.00±0.00,差异有统计学意义(t=667.573,P<0.001).0.5μmol/L激动剂组和1.0μmol/L激动剂组A490值分别为1.349±0.050和1.422±0.053,相对迁移率分别为2.34±0.14和3.59±0.32,明显高于正常对照组的1.203±0.101和1.00±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.01).1.5μmol/L抑制剂组和2.5μmol/L抑制剂组细胞A490值分别为0.849±0.010和0.737±0.030,相对迁移率分别为0.43±0.02和0.27±0.01,明显低于高糖对照组的1.000±0.040和1.00±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.01).0.5μmol/L激动剂组和1.0μmol/L激动剂组PLCγ1磷酸化比值、Akt磷酸化比值和Erk磷酸化比值均明显高于正常对照组,1.5μmol/L抑制剂组和2.5μmol/L抑制剂组PLCγ1磷酸化比值、Akt磷酸化比值和Erk磷酸化比值均明显低于高糖对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 高糖诱导HRMEC中Hedgehog蛋白表达,Hedgehog蛋白可能通过调节GPCRs通路中PLCγ1、Akt和Erk磷酸化水平来调节HRMEC的功能.