丁酸钠对大鼠酒精觅药行为及海马NMDA受体2B亚基基因启动子区H3K9乙酰化的影响

目的 研究丁酸钠对Wistar大鼠酒精觅药行为及海马NMDA受体2B亚基(NMDA receptor 2B subunit,NR2B)基因启动子区H3K9乙酰化表达的影响,探讨酒精觅药行为形成的表观遗传学机制.方法 48只雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为4组:生理盐水组、丁酸钠组、酒精组、丁酸钠酒精组,每组12只.采用腹腔注射的方法造模,采用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验评价大鼠的酒精觅药行为,采用Western-blot、实时荧光定量PCR、染色质免疫共沉淀技术分别检测4组大鼠海马NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化的表达水平.结果 4组大鼠CPP测试值、CPP分值组间均差异有统计学意义(P＜0.05);与生理盐水组CPP测试值[(261.1± 102.2)s]、CPP分值[(48.5±94.6)s]相比,酒精组、丁酸钠酒精组CPP测试值[(406.8±109.2)s、(502.7±72.89)s]、CPP分值[(198.2±119.4)s、(277.5±76.2)s]均增加(P＜0.05),丁酸钠组CPP测试值[(193.4±93.8)s]、CPP分值[(9.7±94.0)s]差异无统计学意义(P＞0.05);与酒精组相比,丁酸钠酒精组CPP测试值增加(P＜0.05).4组大鼠海马NR2B蛋白表达水平、NR2B mRNA表达水平、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平组间均差异有统计学意义(P＜0.05);与生理盐水组NR2B蛋白(1.00±0.28)、NR2BmRNA(1.00±0.14)、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化(1.00±0.25)表达水平相比,酒精组、丁酸钠酒精组NR2B蛋白[(1.40±0.34)、(1.79±0.30)]、NR2B mRNA[(1.26±0.16)、(1.50±0.08)]、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化[(1.68±0.16)、(2.35±0.45)]表达水平均增高(P＜0.05),丁酸钠组海马NR2B蛋白(0.85±0.24)、NR2B mRNA(1.05±0.13)、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化(0.96±0.41)表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);与酒精组相比,丁酸钠酒精组NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平均增高(P＜0.05).CPP分值与NR2B蛋白表达水平(r=0.474,P＜0.05)、NR2B蛋白表达水平与NR2B mRNA表达水平(r=0.468,P＜0.05)、NR2B mRNA表达水平与NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平(r=0.596,P＜0.05)、CPP分值与NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平(r=0.542,P＜0.05)均呈正相关.结论 海马NR2B基因启动子区H3K9乙酰化可能是Wistar大鼠酒精觅药行为形成的表观遗传学机制之一,海马NR2B启动子区H3K9去乙酰化修饰可能是防治酒精依赖的一个新靶点.