超声微泡介导增强型绿色荧光蛋白基因转染视网膜神经节细胞的体内实验

目的 验证超声微泡介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因能否在体内成功转染视网膜神经节细胞(RGCs),是否比传统的转染方式效率高以及这种转染方式是否损伤RGCs.方法 将SD大鼠50只随机分为4组:正常对照组(n=5)、单纯质粒组(n=15)、质粒+超声组(n=15)、超声微泡组(n=15).采用玻璃体腔注射试剂的方法,正常对照组注射5 μl生理盐水；单纯质粒组,注射5μl质粒；质粒+超声组,注射5μl质粒后,立即用0.5 W/cm2超声波辐照大鼠眼球60 s,工作时间控制为1/3(即辐照5s,停10 s,共60 s)；超声微泡组,注射质粒微泡混悬液5 μl后,立即用前述同等能量超声波辐照大鼠眼球.7d后,取大鼠眼球制作视网膜铺片、冰冻纵切片及视网膜EGFPmRNA的RT -PCR.用荧光显微镜观察铺片及切片中EGFP在RGCs的表达情况.用RGCs计数观察RGCs损伤情况[1-2].用RT-PCR对EGFPmRNA进行半定量检测.结果 超声微泡介导EGFP基因转染RGCs的效率明显高于正常对照组、单纯质粒组和质粒+超声组,且对RGCs无明显损伤.结论 在低频超声波的照射下,超声微泡能够在体内安全、有效地介导EGFP基因转染RGCs.