基质金属蛋白酶-9/血管他丁/血管内皮生长因子信号轴在糖尿病足病中的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9/血管他丁/血管内皮生长因子(VEGF)信号轴在糖尿病足(DF)病中的作用.方法 分别采用免疫荧光染色、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot法检测正常人及DF患者足创面处组织中MMP-9、VEGF的mRNA和蛋白表达水平.以人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)为研究对象,分为正常对照组、高糖模型组(含25 mmol/L的葡萄糖)、高糖+抗MMP-9(5μg/ml)组以及高糖+抗血管他丁(5μg/ml)组,分别在12、24、48 h取细胞培养上清液和细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、RT-qPCR及Western blot分别检测VEGF的分泌及表达水平.结果 临床样本检测结果显示,与正常人比较,MMP-9在DF患者足创面处组织中高表达(mRNA水平:P =0.000;蛋白水平:P =0.000);而VEGF在DF患者足创面处组织中呈现显著的低表达(mRNA水平:P =0.003;蛋白水平:P =0.000).细胞实验结果显示,在12、24、48 h分别与正常组比较,高糖组细胞中VEGF分泌及mRNA和蛋白水平表达均显著降低(分泌水平:P=0.032、0.006、0.004;mRNA水平:P=0.003、0.000、0.000;蛋白水平:P=0.000、0.000、0.000);与高糖组比较,两个处理组细胞VEGF分泌及mRNA和蛋白水平表达均显著升高(抗MMP-9组分泌水平P=0.041、0.003、0.000;mRNA水平:P=0.039、0.006、0.005;蛋白水平:P=0.089、0.042、0.037;抗血管他丁组分泌水平P=0.005、0.001、0.000;mRNA水平:P=0.004、0.001、0.000;蛋白水平:P =0.031、0.001、0.000),且呈一定的时间依赖性.结论 DF患者足创面处组织中MMP-9及VEGF表达呈负相关;拮抗MMP-9及血管他丁的表达能显著促进高糖诱导下HUVECs的VEGF分泌及表达水平.