肝癌细胞甲胎蛋白mRNA转染活化的B淋巴细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞的抗肿瘤效应

目的 研究肝癌细胞AFP mRNA转染活化的B淋巴细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞的抗肿瘤作用.方法 分离、纯化B淋巴细胞,重组人可溶性CIM0配体(sCD40L)活化人外周血B淋巴细胞；构建PGEM4Z/AFP/A64-EGFP质粒,加入T7RNA聚合酶,转录具有PolyA尾端的AFP mRNA；将提取的AFPmRNA电转染B淋巴细胞作为实验组,选取GAPDH mRNA转染者作为阴性对照组,未转染的B淋巴细胞作为空白对照组.检测各组B淋巴细胞表面抗原提呈细胞标记分子(CD19、CD20、CD21、CD40、CD80、CD83)及主要组织相容性抗原的表达情况；将3组B淋巴细胞与T淋巴细胞分别按1∶40,1∶20,1∶10和1∶5的比例混合培养、诱导、扩增抗原激活T淋巴细胞并测定吸光度值以检测T淋巴细胞增殖能力；以T淋巴细胞作为效应细胞,肝癌细胞系SMMC7721为靶细胞,检测T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤活性.两两比较采用配对t检验,多组比较采用单因素方差分析,方差不齐时采用Tamhane's T2检验.结果 实验组B淋巴细胞表面标志分子CD19、CD20、CD21、CD40、CD80和CD83的表达水平分别为74±11、78 ±8、80±10、90±11、82±6、56±5,显著高于阴性对照组的51±5、60±7、53±5、73±8、50±5、49±6,以及空白对照组的46±3、54±5、41±3、56±5、52±6、21 ±4(t =5.302、4.812、7.627、5.932、9.142、7.813,11.581、7.036、13.592、12.873、9.235、14.619,P＜0.01).实验组吸光度值显著高于阴性对照组和空白对照组(t=18.203、23.714、15.062、9.417,16.833、19.392、13.871、6.592,P＜0.01).当T淋巴细胞与肝癌细胞系SMMC7721按照40∶1、20∶1和10∶1的比例混合后,实验组B淋巴细胞诱导产生的T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤率分别为43％±4％、32％±4％和22％±3％,显著高于阴性对照组的15％±5％、7％±3％和6％±2％,以及空白对照组的7％±3％、8％±3％和9％±4％(t=9.141、13.272、11.901,14.372、12.835、9.507,P＜0.01).结论 肝癌细胞AFP mRNA转染的B淋巴细胞可有效诱导T淋巴细胞杀伤肝癌细胞.