缺血再灌注对内皮祖细胞功能及iNOS、eNOS的影响

目的 探讨缺血及缺血再灌注对内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡、迁移能力及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 采集志愿者外周血,进行体外EPCs培养,将细胞分为三组,对照组、缺氧组和缺氧复氧组,四唑盐(MTT)法检测细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测iNOS和eNOS的蛋白表达.结果 通过共聚焦显微镜观察,3d左右细胞基本贴壁,面积变大.单个核细胞培养7d后,呈集落样生长,多呈梭形.显微镜下三组细胞计数分别为:(1.83 ±0.92)个、(5.07±0.84)个、(2.11±0.74)个.与对照组(0.24±0.04)比较,缺氧组(0.62±0.06)能够促进EPCs增殖,差异有统计学意义(t=12.142,P＜0.05);而缺氧复氧组(0.39±0.06)与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).缺氧组(18.28±2.05)和缺氧复氧组(14.08±2.11)细胞迁移数量与对照组(15.14±1.25)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).缺氧组[(34.57±0.42)％]、缺氧复氧组[(41.08±0.44)％]细胞凋亡率显著高于对照组[(24.83±0.38)％](x2=13.427,15.084,P＜0.05);缺氧复氧组细胞凋亡率显著 高于缺氧组(x2 =9.657,P＜0.05).与对照组比较,缺氧组、缺氧复氧组iNOS、eNOS表达显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 缺血能够促进EPCs增殖、增加iNOS、eNOS表达,但再灌注治疗后EPCs表达下调.