连接蛋白43在子宫颈癌HeLa细胞线粒体中的定位及分布

目的 研究连接蛋白43 (Cx43)在子宫颈癌HeLa细胞亚细胞结构中的分布,并确认其在线粒体中的定位.方法 通过匀浆及离心的方法将HeLa细胞分离为细胞质、细胞核、线粒体和分离后上清,用免疫电子显微镜观察HeLa细胞线粒体的超微形态学及Cx43在分离的线粒体中的分布和定位,电压依赖性阴离子通道(VDAC1)用于线粒体定位确定.用免疫荧光法对HeLa细胞进行Cx43和线粒体生物标志物VDAC1共染色,确定Cx43在子宫颈癌HeLa细胞线粒体中的定位,进一步用蛋白质印迹法定量分析Cx43在各细胞分离成分中的分布情况,线粒体标志物为细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)和VDAC1,细胞膜黄体生成素受体(LHR)用于定位确定.结果 免疫电子显微镜观察结果显示,在完整的HeLa细胞及分离的HeLa细胞线粒体中均可见到正常的线粒体及囊状肿胀的线粒体,且Cx43和VDAC1均分布在分离的线粒体中.免疫荧光结果显示,Cx43与VDAC1共定位;Cx43在HeLa细胞各亚细胞结构中的表达差异有统计学意义(细胞质:1.23±0.11,细胞核:0.39±0.09,线粒体:3.67±0.59,分离后上清:0.16±0.06,F=84.17,P＜0.05),Cx43在线粒体中富集.结论 Cx43在子宫颈癌HeLa细胞的线粒体中富集,因此,线粒体Cx43很可能成为子宫颈癌诊断、治疗和判断预后的新靶点.