艰难梭菌毒素B受体结合区的表达

目的 通过对艰难梭菌毒素B受体结合区进行基因克隆、表达,获得目的蛋白,为建立快速检测艰难梭菌的方法奠定基础.方法 复苏艰难梭菌,提取基因组DNA,PCR扩增目的基因,回收后与pGEM-T连接进行TA克隆,通过PCR、酶切及基因测序鉴定pGEM-T-CDB3.酶切pGEM-T-CDB3和pGEX-4T-1,回收CDB3和pGEX-4T-1,连接后转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建重组质粒pGEX-4T-1-CDB3,然后应用IPTG诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定目的蛋白大小和特异性.结果 经PCR扩增获得了艰难梭菌毒素B受体结合区(CDB3)基因全长片段1851 bp.克隆质粒pGEM-T与CDB3重组获得了质粒pGEM-T-CDB3,片段长为4800 bp左右.构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-CDB3,目的蛋白经诱导后获得表达.结论 原核蛋白表达载体pGEX-4T-1-CDB3构建成功,并大量表达出目的蛋白,将对艰难梭菌毒素B的快速检测和疫苗的研制奠定良好基础.(中华检验医学杂志,2013,36:324-328)