慢病毒载体介导短发夹RNA沉默Ppif基因对大鼠肾细胞的影响

目的 构建干扰Ppif基因的重组U6慢病毒质粒,观察内源性小干扰RNA(siRNA)的效果.方法 根据siRNA设计原则,设计合成短发卡RNA(shRNA),用于体内转录合成干扰Ppif编码序列的发夹RNA.连接、筛选、酶切,鉴定Pgcl-GFP/U6 Ppif shRNA;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染大鼠肾细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差异.结果 测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Ppif基因的mRNA和蛋白表达均一致降低[(0.582 ±0.014)％],与阴性对照组[(0.946±0.018)％]和空白对照组[(0.893±0.021)％]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢病毒介导的Ppif-shRNA成功在体外敲减了大鼠肾细胞的目的蛋白表达,影响了肾缺血再灌注的发生与发展.