Artemin基因修饰的骨髓间充质干细胞对多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨Artemin(ARTN)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用及对帕金森病(PD)大鼠脑内相关蛋白表达的影响. 方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),将携带ARTN基因的慢病毒载体转染MSCs,获得稳定表达ARTN的MSCs细胞株.应用MTT法测定细胞存活率,Hochest33258荧光染色观察凋亡细胞形态学改变,同时检测Lv-ARTN-MSCs细胞上清液对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞凋亡作用的影响.制备PD大鼠模型,按照随机数字表法分为PD组(左侧纹状体输注生理盐水5μL)、MSCs组(左侧纹状体移植MSCs,1.0×105个/5 μL)、Lv-MSCs组(左侧纹状体移植Lv-MSCs,1.0×105个/5 μL)、Lv-ARTN-MSCs组(左侧纹状体移植Lv-ARTN-MSCs,1.0×105个/5 μL),每组各6只;另取6只大鼠设为假手术组(以等量生理盐水代替6-OHDA,手术步骤及坐标同PD模型大鼠制备).Western blotting检测各组大鼠纹状体酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)表达. 结果 Lv-ARTN-MSCs组可见明显的ARTN蛋白条带.Lv-ARTN-MSCs上清液可明显拮抗6-OHDA引起的细胞存活率降低,与6-OHDA组相比,Lv-ARTN-MSCs组细胞存活率提高13.67％,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞移植8周后,MSCs组、LV-MSCs组、LV-ARTN-MSCs组与PD组大鼠相比,纹状体TH、DAT蛋白表达明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05),以LV-ARTN-MSCs组最明显. 结论 ARTN作为一种分泌蛋白,可以抑制6-OHDA诱导的多巴胺能神经元损伤,推测机制为上调TH、DAT蛋白表达.