和厚朴酚对PM2.5暴露哮喘小鼠呼吸道炎症的影响及其机制

目的 探讨和厚朴酚对细颗粒物(PM2.5)所致哮喘小鼠呼吸道炎症是否具有保护作用及其作用途径.方法 将50只雌性无特殊病原菌(SPF)级Balb/c小鼠按随机数字表法分为5组,每组10只.A组:正常对照组;B组:哮喘模型组;C组:PM2.5暴露哮喘组;D组:TAK-242组;E组:和厚朴酚组.采用卵清蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘小鼠模型,B~E组第0天和第7天经小鼠腹腔注射100 mg/L OVA和氢氧化铝混合液0.1 mL致敏,第14天至第21天,以10 g/L OVA 9 g/L盐水溶液雾化30 min激发;C~E组从首次雾化第1天开始到末次激发气管注入PM2.5激发,隔日1次,共4次;在此基础之上,D组给予TAK-242腹腔注射处理,E组给予和厚朴酚灌胃处理.A组小鼠,以9 g/L盐水代替 OVA同步进行实验.末次激发24 h后麻醉并解剖小鼠,左肺进行肺泡灌洗留取肺泡灌洗液(BALF)进行炎性细胞总数及分类计数;取右肺行HE染色、病理学检查;实时荧光定量PCR分析技术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)mRNA的表达,流式细胞仪检测Th17和 Treg细胞的表达.结果 与A组比较,B组及C组小鼠支气管黏膜上皮细胞变形、脱落,上皮增生变厚,肺泡壁充血水肿,管腔内黏液分泌增加,肺部炎性细胞浸润,C组较B组更为明显,而E组小鼠呼吸道炎症明显减轻;B组及C组BALF中炎性细胞总数分别为(16.79 ± 5.62)× 108/L和(24.58 ± 13.46)×108/L,嗜酸性粒细胞比例为0.1138 ± 0.0223和0.1978 ± 0.0849,均显著高于A组[(4.15 ± 1.35)×108/L、0.0120 ± 0.0023],差异均有统计学意义(均P<0.05);E组BALF中炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞比例[(8.56 ± 3.28)×108/L)、0.0415 ± 0.0135]与C组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);B组及C组PBMCs中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达分别为1.85 ± 0.56、1.82 ± 0.28和2.97 ± 0.41、2.83 ± 0.32,均显著高于 A组(1.06 ± 0.19、1.08 ± 0.17),差异均有统计学意义(均 P <0.05);E组PBMCs中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达(1.60 ± 0.28、1.54 ± 0.25)与C组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);B组及C组PBMCs中Th17细胞的表达水平分别为(2.89 ± 0.61)%、(4.96 ± 0.27)%,均显著高于A组[(1.03 ± 0.35)%],差异均有统计学意义(均 P <0.05);E组 PBMCs中 Th17细胞的表达[(1.83 ± 0.23)%]明显低于C组,差异有统计学意义(P<0.05);B组及C组PBMCs中Treg细胞的表达分别为(4.96 ± 0.35)%、(2.27 ± 0.41)%,均显著低于 A组[(7.37 ± 0.56)%],差异均有统计学意义(均 P <0.05);E组PBMCs中Treg细胞的表达[(6.45 ± 0.38)%]明显高于C组,差异有统计学意义(P<0.05);D、E组情况较B组及C组明显改善.结论 和厚朴酚能减轻PM2.5暴露哮喘小鼠的呼吸道炎症,其作用机制与下调TLR4、NF-κB表达和调节Th17及Treg细胞平衡有关.