衔接蛋白p66Shc在高体积分数氧肺泡上皮细胞损伤中的作用

目的 检测衔接蛋白p66Shc在高体积分数氧(高氧)损伤的A549细胞中的表达,探讨二者之间的关系.方法 在体外培养人A549肺泡上皮细胞系,随机分为对照组[置于含50 mL/L二氧化碳(cO2)培养箱中]、高氧组[通入3 L/min的900 mL/L氧气(O2)和50 mL/L CO2高纯混合气,10 min后密闭培养].倒置相差显微镜观察24 h后细胞形态变化,荧光显微镜测线粒体膜电位,细胞免疫组织化学检测24 h后细胞中p66Shc蛋白的表达,并采用双变量相关分析法分析线粒体膜电位的变化与p66Shc蛋白表达变化二者之间的相关性.结果 1.倒置显微镜下:与对照组相比,24h高氧组细胞形态变圆,间隙加大,活细胞数量明显降低,悬浮细胞明显增多.2.与对照组相比,24h后,高氧组A549细胞红色荧光减弱,绿色荧光增强.3.对照组A549细胞内p66Shc的表达为0.057 664 88±0.006 517 84,高氧组24 h后A549细胞内p66Shc的表达为0.123 600 50±0.004227 23,高氧组较对照组明显增加,差异有统计学意义(t=-24.006,P＜0.001).4.膜电位的下降与p66Shc蛋白表达的增加呈负相关性(R=-0.998,P＜0.001).结论 在高氧诱导的肺泡上皮细胞内,线粒体膜电位下降,p66Shc表达增多,二者呈负相关性,从而推测p66Shc可能参与人肺泡上皮细胞高氧损伤过程.