肠道病毒71型VP1的原核表达及生物活性初步研究

目的 原核表达系统表达肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71) VP1蛋白,并探讨该基因工程蛋白阻断病毒感染及其制备抗体的中和活性.方法 构建pET30a(+)-VP1表达载体、IPTG诱导表达,Western blot鉴定.His亲和纯化后,阻断试验分析该重组蛋白阻断病毒感染活性,免疫小鼠制备多抗分析多抗中和活性.结果 构建的重组菌可有效表达VP1,用其免疫小鼠制备多抗ELISA效价达到1:3200,而中和活性只有1:16,并且该工程蛋白没有表现出阻断活性.结论 本研究原核表达的VP1蛋白能刺激小鼠产生抗体,且抗体具有一定的中和活性,但是该蛋白没有阻断活性,表明该蛋白在原核表达系统中未能形成天然构象从而导致与受体结合的能力较差.