巨噬细胞分化抗原-1通过脾酪氨酸激酶通路促进破骨细胞分化

目的 探讨巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1)分子在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导下破骨细胞分化中的作用.方法 用RANKL及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导C57BL/J6小鼠脾细胞,并使用抗CD11b及CD18抗体进行处理,1周后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,测定细胞TRAP染色阳性率并进行统计学分析;用相同方法于载有骨片的96孔板上培养破骨细胞,利用抗CD11b、CD18抗体,干扰CD11b基因表达的慢病毒及其对照空载病毒转染,对骨片进行扫描电镜拍照并计算骨陷窝面积;提取各组细胞总核糖核酸(RNA)并进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR),测定各组蛋白质对应信使RNA(mRNA)表达水平.结果 对照组、抗CD11b抗体组、抗CD18抗体组及双抗体组平均每孑孔 TRAP阳性细胞数分别为(29.5±4.7)、(17.1±3.8)个(P =0.026)、(26.2±5.1)个(P=0.124)、(19.4±4.3)个(P=0.018),骨陷窝面积分别为(6.1±3.4)、(2.2±1.1)10-2 mm2/片(P=0.0l1)、(5.8±2.9) 10-2 mm2/片(P=0.124)、(2.4±1.3)10-2 mnm2/片(P=0.027),对照病毒组及病毒转染组骨陷窝面积分别为(5.6±3.2)、(1.3 ±0.9)10-2 mm2/片(P =0.006);相对于对照组和抗CD18抗体组,抗CD11b抗体处理的两组活化T细胞核因子-1(NFATc1)、脾酪氨酸激酶(Syk)和c-Fos mRNA表达下调.与对照病毒组比较,病毒转染组NFATc1、Syk和c-Fos mRNA表达下调.结论 Mac-1分子通过其亚基CD11b上调Syk与c-Fos,促进NFATc1的表达,最终发挥促破骨细胞分化效应,而CD18亚基不具备促进作用.