采用微阵列数字PCR检测JAK2基因V617F突变

目的：采用数字PCR检测骨髓增殖性肿瘤相关的JAK2基因 V617F突变，评估该法的灵敏度、重复性和准确性。方法方法学评价。自2014－2015年间复旦大学附属华山医院收治的患者中，选取已知JAK2基因V617F突变的18例真性红细胞增多症病例、11例原发性血小板增多症病例、2例特发性骨髓纤维化病例及未知突变的6例红细胞异常增高病例和10名健康对照者。分别以HEL细胞株DNA和SW480细胞株DNA为突变型对照和野生型对照，稀释突变标准品为30％、10％、1％、0.1％和0.01％以验证微阵列数字PCR体系的灵敏度。使用两例低突变负荷样本（1％和10％），各重复5次，验证数字PCR体系重复性。以MGB探针法荧光定量PCR作为对照参考方法，检测微阵列数字PCR的检测性能。结果实验结果表明两种检测方法相关性高（ R2＝0.9983），而微阵列数字PCR能够检测最低约0.1％的微量突变，相应的突变拷贝数绝对定量为0.16拷贝／μl。突变负荷为1％和10％的样本重复性检测结果CV分别为17.29％和7.50％。此外，MGB探针法和数字PCR法均成功地从31例已知突变的病例样本中均检出JAK2基因 V617F突变阳性，而10名健康对照者都为阴性，两种方法得到的结果是一致的。从6例红细胞异常增高的病例中， MGB法未检出突变，而数字PCR成功检出2例微量突变样本，其突变率分别为0.37％和0.18％。结论微阵列数字PCR在JAK2基因V617F突变检测体系中表现出比荧光定量PCR的更高的灵敏度以及良好的稳定性，有助于其在体细胞突变微量情况下更准确地检出突变，避免漏诊误诊。（中华检验医学杂志，2016，39：176-180）