采用微阵列数字PCR检测JAK2基因V617F突变
Chinese Journal of Laboratory Medicine(2016)
Abstract
目的:采用数字PCR检测骨髓增殖性肿瘤相关的JAK2基因 V617F突变,评估该法的灵敏度、重复性和准确性。方法方法学评价。自2014-2015年间复旦大学附属华山医院收治的患者中,选取已知JAK2基因V617F突变的18例真性红细胞增多症病例、11例原发性血小板增多症病例、2例特发性骨髓纤维化病例及未知突变的6例红细胞异常增高病例和10名健康对照者。分别以HEL细胞株DNA和SW480细胞株DNA为突变型对照和野生型对照,稀释突变标准品为30%、10%、1%、0.1%和0.01%以验证微阵列数字PCR体系的灵敏度。使用两例低突变负荷样本(1%和10%),各重复5次,验证数字PCR体系重复性。以MGB探针法荧光定量PCR作为对照参考方法,检测微阵列数字PCR的检测性能。结果实验结果表明两种检测方法相关性高( R2=0.9983),而微阵列数字PCR能够检测最低约0.1%的微量突变,相应的突变拷贝数绝对定量为0.16拷贝/μl。突变负荷为1%和10%的样本重复性检测结果CV分别为17.29%和7.50%。此外,MGB探针法和数字PCR法均成功地从31例已知突变的病例样本中均检出JAK2基因 V617F突变阳性,而10名健康对照者都为阴性,两种方法得到的结果是一致的。从6例红细胞异常增高的病例中, MGB法未检出突变,而数字PCR成功检出2例微量突变样本,其突变率分别为0.37%和0.18%。结论微阵列数字PCR在JAK2基因V617F突变检测体系中表现出比荧光定量PCR的更高的灵敏度以及良好的稳定性,有助于其在体细胞突变微量情况下更准确地检出突变,避免漏诊误诊。(中华检验医学杂志,2016,39:176-180)
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Key words
Polymerase chain reaction,Microchip analytical procedures,DNA mutational analysis,Bone marrow neoplasms
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