TRAIL基因敲除对葡聚糖硫酸钠诱导的实验性结肠炎小鼠调节性 T细胞的影响

目的 在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的实验性结肠炎小鼠中探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因敲除(TRAIL-/-)对结肠炎症反应及调节性T细胞(Treg)的影响.方法 选取C57BL/6品系的TRAIL-/-小鼠和野生型(WT)小鼠,随机分为WT对照组、WT结肠炎组,TRAIL-/-对照组和TRAIL-/-结肠炎组,每组各10只.口服3.5％的DSS诱导实验性结肠炎模型并评估结肠炎症程度.收集外周血单个核细胞(PBMCs)和肠系膜淋巴结(MLNs),经流式细胞术检测Treg细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量PCR法检测Treg细胞相关转录因子(Foxp3)和细胞因子(IL-10)的mRNA表达水平,分别采用蛋白质印迹法和酶联免疫吸附试验检测Foxp3和IL-10蛋白表达水平.结果 与WT对照组相比,WT结肠炎小鼠PBMCs中Treg细胞比例显著降低[(1.85±0.38)％比(3.12±0.69)％,P<0.05],而MLNs中Treg细胞比例显著增高[(11.79±1.18)％比(6.24±1.04)％,P<0.05].与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL-/-结肠炎小鼠结肠炎症更为严重,PBMCs中Treg细胞比例显著增高[(3.15±0.64)％比(1.85±0.38)％,P<0.05],而MLNs中Treg细胞比例显著降低[(9.80±0.50)％比(11.79±1.18)％,P<0.05].WT结肠炎小鼠PBMCs中Foxp3、IL-10的mRNA和蛋白表达水平均显著低于WT对照组小鼠[Foxp3 mRNA:0.48±0.21比1.06±0.31,IL-10 mRNA:0.23±0.07比1.22±0.38;Foxp3蛋白:0.68±0.12比1,IL-10蛋白:(4.91±0.72)pg/ml比(21.86±2.40)pg/ml,P均<0.05],而MLNs中Foxp3、IL-10的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT对照组小鼠[Foxp3 mRNA:3.71±0.49比1.03±0.15,IL-10 mRNA:11.98±6.10比1.01±0.31;Foxp3蛋白:1.60±0.03比1,IL-10蛋白:(1260.00±18.02)pg/ml比(1184.00±38.62)pg/ml,P均<0.05].与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL-/-结肠炎小鼠PBMCs中Foxp3、IL-10的mRNA及蛋白表达水平显著增高[Foxp3 mRNA:1.80±0.49比0.48±0.21,IL-10 mRNA:1.67±0.99比0.23±0.07;Foxp3蛋白:1.10±0.01比0.68±0.12,IL-10蛋白:(31.33±25.02)pg/ml比(4.58±3.73)pg/ml,P均<0.05],而MLNs中Foxp3、IL-10的mRNA及蛋白表达水平显著降低[Foxp3 mRNA:0.49±0.21比3.71±0.49,IL-10 mRNA:2.80±1.82比11.98±6.10;Foxp3蛋白:1.21±0.12比1.60±0.03,IL-10蛋白:(1158.00±26.48)pg/ml比(1190.00±37.19)pg/ml,P均<0.05].结论 TRAIL基因敲除可能引起外周血及肠系膜淋巴结中Treg细胞数量改变,从而导致小鼠结肠炎加重.