shRNA Twist基因对肺腺癌NCI-H1299细胞增殖和侵袭影响的研究

目的 探究shRNA Twist基因对肺腺癌NCI-H1299细胞增殖和侵袭影响的机制.方法 构建Twist的siRNA干扰表达载体,将NCI-H1299细胞分成3组,即空白对照组,阴性对照组和实验组.空白对照组为未做任何处理的细胞组,阴性对照组是经空白载体的慢病毒转染的细胞组,实验组是由shRNA Twist的慢病毒干扰载体构建的慢病毒转染细胞组.qRT-PCR和Western blot等方法检测Twist的表达;Transwell试剂盒检测细胞侵袭;CCK-8试剂盒检测细胞增殖.结果 (1)慢病毒滴度的检测结果:shRNA-Twist载体慢病毒转染滴度为3×108 TU/ml;(2)qRT-PCR检测结果显示,实验组和阴性对照组相比,Twist的mRNA的相对表达量明显降低,差异有统计学意义(q=3.177,P=0.0234).(3)Western blot检测结果显示,实验组和阴性对照组相比,Twist蛋白相对表达量明显降低,差异有统计学意义(q =4.071,P=0.0304).(4) Transwell实验结果显示,三组之间细胞迁移比较差异具有统计学意义(F=19.472,P=0.000).其中实验组和阴性对照组相比,迁移数量明显降低,差异有统计学意义(q =3.567,P=0.0318).(5)CCK-8检测结果显示,三组增殖率比较差异有统计学意义(F=20.983,P=0.000).实验组与阴性对照组比较增殖率明显降低,差异有统计学意义(q=5.272,P=0.0157).结论 shRNA Twist基因可以明显抑制肺腺癌NCI-H1299细胞的增殖和侵袭.