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脑心肌炎病毒(EMCV)3C真核表达载体的构建及其功能鉴定

李梅,宋娟,孙鹏,宋芹芹,盛琳君,卢明枝,迟苗苗,王宝栋,韩俊

Chinese Journal of Clinical Hepatology（2014）

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Abstract
目的 EMCV的pEGFP-3C真核表达载体的构建及功能鉴定.方法 RT-PCR扩增EMCV功能蛋白3C基因并克隆至pEGFP-C3载体中,经双酶切和测序鉴定.将重组质粒分别转染到BHK-21细胞和293T细胞48 h后,Western-Blot检测3C蛋白酶的表达,以及对PABP1的切割,共聚焦显微镜观测3C荧光表达位置.结果 EMCV的pEGFP-3C重组质粒经双酶切及测序鉴定构建正确.表达的GFP融合蛋白相对分子质量约为49×103,可切割PABP1,并表达于细胞核内.结论 成功构建了EMCV的3C蛋白酶的真核表达载体pEGFP-3C,为进一步研究该蛋白酶的功能及作用奠定了基础.
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Encephalo myocarditis virus,Genes,Plasmids
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