乙型肝炎病毒感染不同时期外周血单个核细胞微小RNA表达变化及其意义

目的 探讨微小RNA( microRNAs,miRNAs)在乙型肝炎病毒(HBV)感染不同时期表达谱的变化及其意义.方法 建立检测miRNA的RNA DNA嵌合探针液态芯片(xMAP)法,对其特异性、重复性、准确性进行评估；2010年10月至201 1年10月收集苏州大学附属第一医院住院和门诊急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬化及肝癌患者各40例,健康对照40名；采用xMAP液态芯片技术检测外周血单个核细胞(PBMC)中miR-191、-223、-222、-145、-21、-31、-126、-20a、-372的表达水平,以miR-103为内参,将(靶miRNA分子平均荧光强度-对应本底平均荧光强度)/(miR-103平均荧光强度-对应本底平均荧光强度)的比值作为有效数据分析各组miRNAs表达特征,采用SPSS 17.0统计软件,组间比较用单因素方差分析,若差异有统计学意义,用LSD-t法行组间两两比较.结果 xMAP液态芯片法检测miRNAs特异性为100％；重复性实验证实高值参比品的检测信号CV值均小于5％,低值参比品的检测信号CV值均小于10％；准确性实验证实9种miRNA的回收率为(100±5)％;miR-222(F=1.32,P＞0.05)、-191 (F=1.98,P＞0.05)、-145 (F=0.78,P＞0.05)、-21(F=0.64,P＞0.05)、-31(F=0.83,P＞0.05)、-372(F=1.75,P＞0.05)组间表达差异无统计学意义；miR-223组间表达差异有统计学意义(F=14.56,P＜0.05),在急性乙型肝炎组表达最高(15.37±4.01),肝癌组表达最低(6.91±3.18)；组间miR- 126表达差异有统计学意义(F=17.43,P ＜0.05),在健康对照组表达最高(6.33±2.75),肝癌组表达最低(2.38±1.07)；组间miR-20a表达差异有统计学意义(F=19.48,P ＜0.05),健康对照组表达最低(0.33±0.18),肝癌组表达最高(0.81±0.24).结论 xMAP液态芯片法检测miRNA特异性强、准确度高、重复性好,适合大通量临床检测；miRNA的检测可为HBV感染的慢性化进展机制提供一个新的研究线索.