叉状头/翅膀状螺旋转录因子3对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的 观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)在结直肠癌中的表达及其短发夹RNA(shRNA)对结直肠癌细胞凋亡的影响.方法 Western blot检测结直肠癌组织和对应的癌旁组织中Foxp3的表达水平.同时Western blot检测人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO及人肠黏膜细胞CCC-HIE-2中Foxp3的表达水平.转染靶向Foxp3基因的shRNA的表达载体Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2和对照序列载体shRNA control至人结直肠癌细胞中,分别命名为Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2、shRNA control组.同时设置未转染组,未转染组中只加入转染试剂.Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Foxp3水平,筛选出干扰效率较高的shRNA.流式细胞术检测48h细胞凋亡.结果 Foxp3在癌旁组织及结肠癌组织中表达水平依次为:0.24±0.05、0.78±0.08,差异有统计学意义(t=63.254,P=0.000).Foxp3在人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO中的表达水平均高于人肠黏膜细胞CCC-HIE-2,且Foxp3的表达水平由低到高依次为:RKO、HCT116、SW480,后期选用SW480继续研究.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2 组细胞中Foxp3蛋白表达水平依次为:0.92±0.05、0.93±0.07、0.21±0.04、0.34±0.06,mRNA 表达水平依次为:1.00±0.07、1.01±0.08、0.53±0.06、0.79±0.08,后续选用Foxp3 shRNA2干扰Foxp3表达.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA2组细胞凋亡率依次为(13.21±3.12)%、(12.98±3.54)%、(32.01±6.72)%.Foxp3 shRNA2组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达水平依次为:0.86±0.05、0.85±0.06、0.26±0.05,活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达水平依次为:0.38±0.09、0.39±0.08、0.88±0.06,磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)表达水平依次为:0.40±0.06、0.39±0.04、0.22±0.05.结论 Foxp3在结直肠癌组织及细胞中均表达上调,干扰Foxp3表达能促进人结直肠癌细胞凋亡,作用机制可能与STAT3信号通路有关.