亚甲蓝对过氧化氢诱导小鼠巨噬细胞线粒体途径凋亡的影响

目的 评价亚甲蓝对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞线粒体途径凋亡的影响.方法 小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基,采用随机数字表法分为6组(n=24):对照组(C组)、H2O2组、不同浓度亚甲蓝预防性给药组(MB1.2组)和不同浓度亚甲蓝治疗性给药组(MB3.4组).H2O2组在培养基中加入50 μmol/L H2O2;MB1.2组于加入H2O2前30min时、MB34组于加入H2O2后30 min时在培养基中加入亚甲蓝,终浓度分别为0.1μmol/L(MB1组和MB3组)和1.0 μmol/L(MB2组和MB4组).于各组培养或孵育24 h时,采用噻唑蓝比色法测定细胞存活率,采用DHE荧光探针法测定细胞ROS活性,采用分光光度计测定上清液LDH活性,采用比色法测定细胞SOD活性,采用罗丹明123染色法测定线粒体膜电位(MMP),采用ATP生物发光法测定ATP含量,采用Western blot法检测caspase-3前体及剪切体P20蛋白和P18蛋白表达,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与C组比较,其余5组细胞存活率、SOD活性、MMP和ATP含量降低,ROS活性和上清液LDH活性升高,caspase-3前体及剪切体P20蛋白和P18蛋白表达上调,早期凋亡率和晚期凋亡率升高(P＜0.05).与H2O2组比较,MB1-4组细胞存活率、SOD活性、MMP和ATP含量升高,ROS活性和上清液LDH活性降低,caspase-3前体及剪切体P20蛋白和P18蛋白表达下调,早期凋亡率和晚期凋亡率降低(P＜0.05).与MB1组比较,MB2组细胞存活率降低,caspase-3剪切体P18蛋白表达下调,MB3组细胞存活率和SOD活性降低,ROS活性增高(P＜0.05).与MB4组比较,MB2组caspase-3剪切体P18蛋白表达下调,早期凋亡率和晚期凋亡率降低,ROS活性升高,MB3组ROS活性升高(P＜0.05).结论 亚甲蓝减轻H2O2诱导小鼠巨噬细胞氧化损伤的机制与抑制线粒体途径凋亡有关.