绿色裸小鼠脑组织中增强型绿色荧光蛋白表达分析

目的 分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因裸小鼠(绿色裸小鼠)脑组织中EGFP的表达情况,为绿色裸小鼠的脑内移植应用提供依据. 方法 以本实验室自建的绿色裸小鼠Foxn1nu.B6-CAG-EGFP/SU为实验对象,采用半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析小鼠主要器官组织/细胞和脑不同部位组织中EG FP mRNA表达水平,通过荧光显微镜观察小鼠全身主要器官组织和全脑不同层面组织中绿色荧光强度,应用荧光分光光度计定量分析、免疫组化染色定性观察小鼠脑不同部位组织中EGFP蛋白含量及阳性细胞的表达. 结果 半定量RT-PCR结果显示,绿色裸小鼠主要器官组织/细胞均不同程度表达EGFP.荧光显微镜下观察到脑不同层面组织均能显示绿色荧光,且亮度呈现部位差异,其中小脑皮层、海马、嗅球等部位荧光较亮.荧光定量PCR和荧光分光光度计定量分析表明,与大脑皮质相比,小脑皮层、海马和嗅球等组织EGFP mRNA和蛋白的表达水平较高.免疫组化染色显示,小脑浦肯野细胞、海马锥体细胞、嗅球颗粒细胞等呈现EGFP强阳性反应. 结论 绿色裸小鼠脑组织均不同程度表达EGFP,其中小脑皮层、海马和嗅球等部位表达较高,因此脑也适合做脑内移植实验研究.