人源TRAIL胞外段基因的克隆、表达与功能的初步检测

目的 获得人源TRAIL胞外段结构域在大肠杆菌中可溶性表达,并初步鉴定其功能.方法 RT-PCR法从人外周血单个核细胞中扩增TRAIL胞外段基因,克隆入pGEM-T-Easy载体,DNA序列测定鉴定正确性.为了便于纯化目的蛋白,将其克隆入原核表达载体pET-30a,并在其氨基端加上组氨酸标签.采用E.coli BL21(DE3)表达,Ni亲和柱分离纯化目的蛋白.SDS-PAGE和Western blot鉴定原核表达产物.MTT法、PI染色法及瑞氏-姬姆萨染色法观察TRAIL-His蛋白的生物学活性.结果 所表达目的蛋白相对分子质量(Mr)与预期蛋白Mr相一致,该蛋白分别可以与抗TRAIL多克隆抗体及抗组氨酸标签抗体反应,并可抑制人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的增殖和诱导Jurkat细胞凋亡.结论 获得了具有生物学活性的TRAIL蛋白,为对其生物学功能及肿瘤治疗的进一步研究奠定了基础.