血管内皮生长因子基因在人胚胎胰岛干细胞中的表达

目的 构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因的慢病毒载体,转染人胚胎来源的胰岛干细胞(hPSC),探讨VEGF在胰岛干细胞中的体外表达水平及其影响因素.方法 将VEGF基因克隆入慢病毒载体,利用293T细胞包装出病毒,按拷贝数分别为2、5、10转染胰岛干细胞,测定不同转染组VEGF的分泌水平.结果 含VEGF的病毒上清可以在体外培养条件下成功转染胰岛干细胞,经潮霉素筛选3 d后,对照组及拷贝数分别为2、5、10的转染组每1×106个细胞每小时VEGF的分泌量分别为(60.3±13.4)、(1622.0±302.0)、(2270.0±340.0)、(3090.0±465.0)ng/L.对照组与转染组间(P＜0.05)以及各转染组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 含VEGF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的胰岛干细胞,使其持续高表达VEGF,通过改变转染拷贝数可在一定水平上控制VEGF的分泌水平.