多阶段抗原的结核分枝杆菌亚单位疫苗SHP／TMD的免疫原性及保护性研究

目的：设计构建包含结核分枝杆菌（M．tb）感染多阶段抗原的融合蛋白亚单位疫苗 SHP，在中国 M．tb 感染者和小鼠模型中评价其免疫原性和抗感染保护性。方法选择 M．tb 复制期分泌抗原 Rv0577、休眠期抗原 Rv2623和 PE ／PPE 家族抗原 Rv3478，构建并原核表达融合蛋白 SHP；以基于 TB-IGRA 的全血IFN-γ分析试验（WBIA）检测 SHP 及其亚组分蛋白诱导中国 M．tb 感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的特异性 IFN-γ水平及其差异；以 SHP 联合佐剂 TMD 皮下免疫 C57BL／6小鼠，9周后处死并检测特异性抗体滴度、脾淋巴细胞培养上清中特异性 Th1型细胞因子水平以及肺脏 IFN-γ、TNF-α、IL-10和 iNOS 的表达水平；以 M．tb H37Rv 毒株攻毒4周后评价 SHP／TMD 的抗感染保护性。结果成功构建、表达融合蛋白 SHP，SHP及其亚组分蛋白刺激 M．tb 感染者淋巴细胞产生的 IFN-γ浓度均显著性高于健康对照者[如 SHP 刺激值分别为（1420．0±253．9）pg／mL 和（236．1±95．1）pg／mL，t ＝2．063，P ＜0．01]。SHP／TMD 诱导产生显著高水平的特异性 IgG 抗体及其亚类，IgG2a／IgG1趋向 Th1型应答；SHP／TMD 免疫小鼠的脾淋巴细胞诱导显著高水平的特异性 IL-2、IFN-γ和 TNF-α；SHP／TMD 免疫小鼠肺脏组织 IFN-γ、TNF-α及 iNOS 表达水平显著上升。此外， SHP／TMD 显著降低 M．tb 急性感染小鼠肺、脾脏荷菌量（如 SHP／TMD 组肺脏荷菌量相对 TMD 组减少了1．03 log， F ＝1518，P ＜0．05），同时肺部病理病变减轻。结论以中国 M．tb 感染者 T 细胞识别的多阶段优势表达抗原构建亚单位疫苗 SHP／TMD，免疫小鼠可提供显著的抗 M．tb 急性感染的保护性，主要与 SHP 抗原特异性CD ＋4 T h1型应答有关。