干扰串珠素表达对硬膜外瘢痕细胞中Ⅰ型胶原蛋白生成的影响

目的 探讨干扰串珠素表达对椎板切除术后硬膜外瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白生成的影响. 方法 选取30 只2个月龄的SD雄性大鼠,行后路L4-5腰椎全椎板切除术.术后第20天取每只大鼠硬膜后方的瘢痕组织,采用组织块贴壁法进行细胞培养.筛选第3代瘢痕组织培养的成纤维细胞分为3组(n=6):慢病毒介导小发夹RNA(shRNA)干扰组[进行慢病毒介导shRNA干扰串珠素表达实验]、纯慢病毒无shRNA组和空白组.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-Blot检测各组Ⅰ型胶原蛋白的生成量,并进行比较.结果 最佳感染复数为100时,细胞形态正常,轮廓清晰,确定其为最佳感染复数值.RT-PCR测定慢病毒介导shRNA干扰组、纯慢病毒无shRNA组、空白组Ⅰ型胶原蛋白RNA目的条带吸光度与内参条带吸光度比值平均分别为0.043±0.003、0.473±0.011、0.475 ±0.013,Western Blot测定Ⅰ型胶原蛋白RNA目的条带吸光度与内参条带吸光度比值平均分别为0.190±0.005、2.116±0.012、2.122±0.009,3组间以上项目比较差异均有统计学意义(P＜0.05),其中慢病毒介导shRNA干扰组Ⅰ型胶原蛋白生成量较纯病毒无shRNA组及空白组明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 干扰串珠素表达能有效减少椎板切除术后硬膜外瘢痕成纤维细胞生成Ⅰ型胶原蛋白,对抑制术后硬膜外瘢痕形成有一定作用.