利用Cre/loxP系统定位腺苷A2A受体在小鼠视网膜上的分布

目的:运用Cre/loxP系统来定位腺苷A2A受体(A2AR)在小鼠视网膜上的分布情况.方法:实验研究.将雄性B6.FVB(Cg)-Tg(Adora2a-cre) KG139Gsat/Mmucd(简称A2A-cre)小鼠与雌性B6.129S6-Gt(ROSA) 26Sortm9(CAG-tdTomato) Hze/J(简称Ai9)小鼠交配,对新生小鼠基因型进行鉴定,并选取5只4周龄A2A-cre+,Ai9鼠,此小鼠表达的Cre酶能敲除Ai9小鼠中的STOP序列使Tomato荧光蛋白表达.采用免疫荧光方法分别将Tomato红色荧光蛋白与不同类型的视网膜细胞抗体共标记,通过观察Tomato红色荧光蛋白和视网膜细胞特异性抗体的共定位结果,来明确A2AR在视网膜上的定位情况.结果:免疫荧光结果显示Tomato+细胞主要分布在视网膜神经节细胞层和内核层,外核层并没有发现.其中神经节细胞层中的Tomato+细胞少数为神经节细胞,多数为异位无长突细胞,而分布于内核层的Tomato+细胞主要为Müller细胞和无长突细胞.进一步对无长突细胞亚型分析发现,Tomato+无长突细胞多数为AⅡ型无长突细胞,而胆碱能无长突细胞和多巴胺能无长突细胞并无Tomato+表达.结论:在4周龄A2A-cre+,Ai9小鼠视网膜中,A2AR主要表达于神经节细胞、无长突细胞和Müller细胞中.