微小RNA-488靶向6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3基因对前列腺癌细胞增殖与糖酵解的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-488对前列腺癌细胞株增殖及糖酵解能力的影响及其机制.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-488在前列腺癌细胞株的表达.生物信息学、双荧光素酶实验验证miR-488的靶点,转染miR-488模拟物24 h后,以25-g蛋白行Western blot、Real-time PCR检测6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)的表达.转染miR-488模拟物或同时转染过表达PFKFB3质粒24 h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测PC-3、DU145细胞增殖,通过糖摄取及乳酸分泌实验检测糖酵解能力.结果 与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较,miR-488在PC-3、DU145细胞中的表达水平分别为0.26±0.03 (P=0.031)、0.19 ±0.04(P =0.021),而在22RV1、LNCaP细胞中的表达差异无统计学意义.上调miR-488表达后,PC-3、DU145细胞的糖摄取率分别为对照组的0.54 ±0.03(P =0.042)、0.52±0.叭(P=0.032),乳酸分泌率分别为对照组的0.55 ±0.02(P =0.037)、0.61±0.17(P =0.048),提示糖酵解能力明显下降,细胞增殖能力明显降低.生物信息学及双荧光素酶实验均表明PFKFB3是miR-488的靶点,上调miR-488表达后,PFKFB3 mRNA及蛋白表达均明显降低.同时上调miR-488与PFKFB3表达后,细胞的糖摄取分别为0.79 ±0.12、0.82±0.11,乳酸分泌分别为对照组的0.77 ±0.07(P=0.015)、0.83±0.04(P =0.026),提示糖酵解能力升高.此外,细胞增殖能力也明显升高.结论 miR-488可通过下调靶蛋白PFKFB3的表达,从而调控前列腺癌细胞的增殖与糖酵解.