LSD1过表达及去甲基化作用缺失质粒的构建与鉴定

目的 评估赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在人胚肾细胞HEK293T中的表达水平.方法 采用PCR扩增LSD1片段,重叠PCR扩增LSD1去甲基化作用缺失片段,构建大鼠特异性LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒,并经琼脂糖凝胶电泳和测序进行验证.将验证后的两种重组质粒与空白载体分别进行包病毒,感染HEK293T后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞,再用Westem Blot和实时定量PCR检测稳定表达的HEK293T细胞内LSD1的表达情况.结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明,LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒构建成功.Western Blot和实时定量PCR检测结果显示,与空白对照组相比,LSD1过表达组和LSD1去甲基化片段缺失组HEK293T细胞中LSD1蛋白及mRNA的相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(均P＜0.01).结论 构建的LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在HEK293T细胞中实现了LSD1基因的过表达,为进一步研究LSD1基因与相关疾病的关系以及LSD1去甲基化作用奠定了基础.