正交试验设计建立多因素的海藻酸钠复合载体立体培养软骨细胞体系

目的 通过正交试验设计研究四种主要因素对软骨细胞增殖的影响,探讨海藻酸钠胶体复合载体体外培养软骨细胞增殖的最佳配比培养体系,为组织工程种子细胞的研究提供实验依据. 方法 建立单层贴壁和海藻酸钠复合载体立体培养细胞模型,采用正交试验4因素2-way和4因素3-way设计,用XTT方法检测软骨细胞在一定浓度的复合因子包括碱性成纤维细胞生长因子、透明质酸钠、纤维连接蛋白、壳聚糖的完全培养基中的增殖情况;采用倒置、相差、激光共聚焦显微镜的形态学观察;采用LDH检测复合材料对细胞的毒性反应,确定体外培养体系方案. 结果 正交试验设计能确定各因素的有效浓度及配比方案,其中碱性成纤维细胞生长因子与透明质酸有共协同作用,在DMEM/Ham's F12复合培养基的海藻酸钠载体支架中培养软骨细胞能快速增殖,细胞数48 h就增殖3倍多,Safranine O GAG染色显示传至9代仍然产生大量蛋白聚糖基质;LDH检测未见毒副作用;该复合载体具有良好的成形性和组织相容性. 结论 在DMEM/Ham's F12复合培养基的海藻酸钠载体中培养能快速增殖并有利于维持软骨细胞表型及功能的表达.