微小RNA-19b-3p靶向作用卷曲螺旋结构域6对黑色素瘤细胞增殖、侵袭及小鼠肿瘤体积的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-19b-3p靶向调控卷曲螺旋结构域6(CCDC6)在黑色素瘤细胞增殖、侵袭及小鼠肿瘤体积的机制.方法 收集黑色素瘤组织及健康人群痣组织各56例.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定miR-19b-3p与CCDC6的相对表达量,细胞增殖与毒性(CCK-8)检测WM35细胞增殖能力,细胞侵袭实验检测WM35细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测CCDC6及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平,荧光素酶报告分析验证miR-19b-3p与CCDC6关系,裸鼠肿瘤模型建立以探究miR-19b-3p对肿瘤体积的影响.应用SPSS 19.0统计软件分析,计数资料组间比较采用x2检验.两两比较和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析,相关分析采用Pearson法.结果 与良性痣组织(1.43±0.38)比较,黑色素瘤组织(2.89±0.46)中miR-19b-3p水平明显增加(t=6.823,P＜0.05),且miR-19b-3p与Ⅲ/Ⅳ期(x2=12.087,P＜0.05)及发生远处转移(x2=12.600,P＜0.05)显著相关.与空白对照组[miR-19b-3p:1.16±0.28;细胞侵袭数:(26.35±4.73)个/HF]和miR对照组[miR-19b-3p:1.22 ±0.30;细胞侵袭数:(28.16±4.80)个/HF]比较,miR-19b-3p模拟物组[miR-19b-3p:4.06±0.28,t=3.977,江4.003,P＜0.05;细胞侵袭数:(49.64±5.11)个/HF,t =3.981,t=4.500,P＜0.05] miR-19b-3p表达水平及细胞侵袭能力均显著增高(P＜0.05),而miR-19b-3p抑制剂组[miR-19b-3p:0.41±0.08,=3.771,t=3.579,P＜0.05;细胞侵袭数:(14.47 ±0.96)个/HF,t=3.669,t=4.004,P＜0.05] miR-19b-3p表达水平及细胞侵袭能力均显著降低.CCK-8检测结果显示,在24、48、72 h时,miR-19b-3p模拟物组细胞的增殖能力显著增强,miR-19b-3p抑制剂组增殖能力显著下降(F=4.026、4.609、7.446,P＜0.05).与miR对照组比较[体积:(467.34±36.75) mm3;CCDC6:1.00±0.12;miR-19b-3p:2.17±0.42],miR-19b-3p模拟物组小鼠黑色素瘤组织的体积[(1 058.66±66.17) mm3]显著增加,CCDC6表达显著降低(0.42±0.08),miR-19b-3p水平显著增加(4.01±0.66),差异均有统计学意义(t=22.836,t =8.129,t=10.663,P＜0.05).结论 miR-19b-3p可促进黑色素瘤的侵袭与增殖,其机制与调控下游CCDC6及p-Akt密切相关.