非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L构建及毒力初步评价

目的 通过构建非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L,在细胞和小鼠体内分别评价病毒毒力.方法 通过同源重组构建非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L,通过病毒的细胞扩散能力和复制能力,以及小鼠呼吸道感染实验和小鼠尾部划痕实验分别评估NTV-C7L的体外和体内毒力.结果 经同源重组蓝白斑纯化获得的非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L,通过PCR和Western blot鉴定证明C7L基因正确插入并能表达C7L蛋白;在人胚肺成纤维细胞(MRC-5)和小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/C 3T3)中,NTV-C7L的扩散能力和复制能力比NTV强,但低于VTT;痘苗病毒小鼠滴鼻实验结果表明,106pFU病毒感染后TTV组小鼠体重与NTV及NTV-C7L组相比,体重下降差异具有统计学意义(t=6.56,P＜0.001;t=5.73,P＜0.001),NTV组与NTV-C7L组相比,体重下降差异无统计学意义(t=0.597,P=0.081);107pFU病毒感染后,NTV组及NTV-C7L组体重下降与TTV组相比,差异具有统计学意义(t=12.86,P＜0.001;t=10.71,P＜0.001).NTV组与NTV-C7L组相比,体重下降差异具有统计学意义(t=4.616,P＜0.001).小鼠尾部皮肤划痕实验表明,接种106pFU VTT组小鼠在第5天尾部形成较为明显皮肤红肿、损伤,而107pFU NTV组和NTV-C7L组仅在局部形成红肿,且范围较VTT小,后逐渐结痂愈合.结论 非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L在细胞内及小鼠体内毒力较NTV升高,但明显低于VTT,为痘苗病毒载体优化及应用提供了参考数据.