肢体缺血/再灌注损伤诱发大鼠小肠组织自噬的机制研究

目的 观察大鼠肢体缺血/再灌注损伤(limb ischemia/reperfusion injury,LI/RI)对小肠组织自噬的影响. 方法 采用大鼠LI/RI模型,将雄性SD大鼠48只按随机数字表法随机分为两组(每组24只):假手术组(S组)和缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,两组分别再分为再灌注0(T0)、2(T2)、4(T4)、8 h(T8)4个亚组,每亚组6只.I/R组阻断血流3h后再灌注,S组不阻断血流,分别于上述4个时点测定各组血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,荧光显微镜下观察小肠细胞自噬小体,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测自噬相关基因Beclin1、Atg5的mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬标志蛋白LC3蛋白的表达水平. 结果 I/R组T2、T4、T8时点血清LDH分别为[(4 623±397)、(5046±413)、(4 762±431) U/L](P<0.05),与S组相同时点比较,分别升高约78％、87％、81％;I/R组荧光显微镜下单位面积自噬小体与S组比较明显增加;I/R组T2、T4、T8时点Beclin1表达增加,与S组比较,分别增加约42％、69％、33％(P<0.05);I/R组T2、T4、T8时点Atg5表达增加,与S组比较,分别增加约80％、121％、73％(P＜0.01);I/R组T2、T4、T8时点LC3表达增加,与S组比较,LC3Ⅱ与LC3I的比值分别增加约169％、186％、176％(P＜0.01). 结论 LI/RI可致大鼠小肠组织自噬水平增加.