水通道蛋白4调控恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 观察抑制胶质瘤细胞LN229中水通道蛋白4(AQP4)的表达对胶质瘤细胞凋亡的影响,探讨其分子机制.方法 利用小RNA干扰(siRNA)技术稳定转染恶性胶质瘤细胞株LN229并得到细胞克隆(实验组siAQP4/LN229和对照组scr/LN229),Western blot技术检测AQP4的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的存活率;流式细胞术(FCM)检测细胞色素C(Cyt-C)含量的变化,并用Western blot检测Cyt-C、bcl-2及Bacl的变化.建立裸鼠皮下成瘤模型,接种siAQP4/LN229和scr/LN229两组细胞(每组20只),观察AQP4降表达对移植瘤生长的影响.结果 稳定转染LN229筛选出AQP4降表达的稳定克隆(clone 2),与对照组比较AQP4的表达明显降低,MTT比色法分别检测在6 d内两组细胞的存活率,第6天存活率分别为:scr/LN229组(587.00±4.68)%.siAQP4/N229组(317.00±26.30)%,差异有统计学意义(P＜0.05);应用流式细胞术检测发现Cyt-C的平均荧光强度分别为ser/LN229组(57.20±16.64),siAQP4/LN229组(468.80±46.90),差异有统计学意义(P＜0.05);在蛋白水平上,siAQP4/LN229组Cyt-C含量的相对灰度值(1.62±0.16)较scr/LN229组(0.83±0.29)显著升高,siAQP4/LN229组B8d含量(1.30±0.24)较ser/LN229组(0.56±0.21)显著增加,而siAQP4/LN229组bcl-2含量(0.53±0.03)较scr/LN229组(0.73±0.12)的表达明显降低(P＜0.05).裸鼠皮下成瘤实验显示第6周时,成瘤平均体积分别为对照组(402.67±34.27)mm3,实验组(65.15±32.12)mm3,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AQP4能够调控胶质瘤细胞LN229的凋亡,其调节机制可能与Cyt-C的释放及凋亡相关基因Bad和bcl-2有关.