先天显性脊柱裂胎鼠羊水蛋白谱差异性分析

目的 采用2-D/质谱电泳方法,比较孕17d正常组胎鼠和全反式维甲酸诱导的显性脊柱裂胎鼠羊水蛋白表达谱的变化,筛查先天性显性脊柱裂相关羊水标记物.方法 孕10d大鼠,采用全反式维甲酸胃管灌饲的方法建立先天显性脊柱裂动物模型24只(脊柱裂组),正常对照组9只(正常组).孕17d晨,麻醉孕鼠,显微镜下获取每个胎囊的羊水及胎鼠,并检查胎鼠畸形情况.提取羊水蛋白质,merck试剂盒去除高丰度白蛋白和IgG,行2-D、胶体染色、图像扫描分析及质谱检测,Western-blot进一步验证2-D结果.结果 鉴定出6种蛋白质(其中1种蛋白质可能对应多个蛋白点):甲胎蛋白(AFP)、转铁蛋白(transferrin,TF)、信号识别颗粒受体B亚基(srprb)55kDa、srprb 77kD、α-1抗蛋白酶及载脂蛋白A4(Apo A4).其中,Apo A4和Srprb 77 kDa在脊柱裂组表达下调,而TF、Srprb 55 kDa和a-1抗蛋白酶在脊柱裂组表达上调.46个蛋白质点被鉴定为AFP及其片段,11个AFP蛋白点在脊柱裂组表达降低,35个蛋白点在脊柱裂组表达升高.通过Western-blot共发现69 kDa、52 kDa、36 kDa、24 kDa和14 kDa 5种分子量的AFP片段,其中69 kDa的AFP在脊柱裂组和正常组含量均为最高.脊柱裂组与正常组比较,AFP上调42％,而Apo A4下调44％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究发现羊水中6种蛋白质与显性脊柱裂畸形发生有关,进一步研究这些差异表达蛋白,可以为了解脊柱裂的发病机制和产前诊断提供实验依据.