急性髓系白血病患者骨髓涂片FMS样酪氨酸激酶3、NPM1和c-kit基因检测及临床研究

目的：探讨提取贮存骨髓涂片DNA的方法，通过对急性髓系白血病（AML）患者FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）、NPM1及c-kit基因突变进行检测，分析三种基因突变与AML临床特征之间的关系。方法收集55例AML患者骨髓涂片，采用聚合酶链反应（PCR）、DNA测序和分子克隆方法对FLT3-内部串联重复（ITD）、NPM1和c-kit基因突变进行检测及分析，记录患者疾病缓解、进展及生存时间。结果实验证实对于低温冻存、未经瑞特染色、未用化学方法固定的骨髓涂片标本及室温贮存、经瑞特染色脱色后的标本均能用苯酚∶氯仿∶异戊醇法成功提取DNA。从骨髓涂片中提取的DNA可用于PCR、直接测序和分子克隆测序分析。在55例AML患者中，FLT3-ITD阳性10例（18.2%），其中9例为杂合型突变，1例为纯合型突变。FLT3-ITD阳性组较阴性组完全缓解（CR）率低，无事件生存（EFS）和总生存（OS）时间短（P＜0.05）。NPM1基因杂合型突变9例（16.4%），全部为A型突变。10个月以内NPM1突变组患者EFS率比野生组高（P＜0.05），19个月以内NPM1突变组OS率比野生组高（P＜0.05）。9例NPM1突变患者中FLT3-ITD阳性3例，CR率由高到低依次为NPM1+ FLT3-ITD-、NPM1- FLT3-ITD-、NPM1- FLT3-ITD+、NPM1+ FLT3-ITD+（P＜0.05），且NPM1- FLT3-ITD+是影响OS的危险因素（RR＝1.250，P＝0.005）。55例患者中，c-kit基因突变2例（3.6%），分别为D816H突变型和D816V突变型；c-kit基因突变患者与FLT3-ITD阳性及NPM1突变患者无重叠。结论 FLT3-ITD突变为AML患者预后不良的分子标志，NPM1基因突变可能提示预后较好，NPM1- FLT3-ITD+是影响OS的危险因素。AML中c-kit基因突变率低，未见其与FLT3、NPM1基因突变重叠。