结核 DNA 疫苗肌肉注射加电转染不同免疫方案免疫效果的研究

目的：研究结核DNA疫苗肌肉注射加电转染不同免疫方案的免疫效果，获得DNA疫苗肌肉注射加电转染免疫的最佳方案。方法40只BALB/c小鼠随机分为4组：（1）生理盐水组。（2）50μg Ag85A DNA组。（3）100μg Ag85A DNA组。上述3组分别肌肉注射加电转染免疫3次。（4）混合Ag85A DNA免疫组，第1和3次各肌肉注射加电转染10μg Ag85A DNA，第2次肌肉注射加电转染100μg Ag85A DNA，每2周免疫1次。最后1次免疫后2周、6周每组各杀5只小鼠，用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平；用流式细胞术检测小鼠全血单个核细胞分泌IFN-γ的Th1细胞和分泌IL-4的Th2细胞比值；用定量RT-PCR检测小鼠肌肉电转染部位Ag85A DNA的含量。用ELISA方法检测小鼠免疫前、第1～3次免疫后10 d小鼠血清特异性抗体水平。结果免疫结束后2周，小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ水平：混合Ag85 A DNA免疫组[（703．66±394．74） pg/ml]和50μg Ag85A DNA组[（648．60±439．41） pg/ml]明显高于生理盐水组[（70．58±108．76） pg/ml]（t值分别为3．975、3．629，P值分别为0．0004、0．0010）和100μg Ag85A DNA组[（86．08±135．73） pg/ml]（t值分别为3．878、3．532，P值分别为0．0005、0．0013），但混合Ag85A DNA免疫组和50μg Ag85A DNA组之间差异无统计学意义（t＝0．3457，P＝0．7318）；全血单个核细胞内Th1/Th2细胞比值：混合Ag85A DNA免疫组（3．82±1．09）均显著高于生理盐水组（0．37±0．11）、50μg Ag85A DNA组（1．20±0．80）、100μg Ag85A DNA组（1．10±0．60）（t值分别为2．980、2．260、2．352，P值分别为0．0058、0．0315、0．0257）；肌肉注射加电转染部位 Ag85A DNA 含量：100μg Ag85A DNA 组[（963．40±892．79）拷贝]显著高于50μg Ag85 A DNA组[（270．90±398．18）拷贝]和混合Ag85 A DNA免疫组[（205．80±136．95）拷贝]（t值分别为2．639、2．887，P值分别为0．0144、0．0081）。免疫结束后6周，小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ水平：混合Ag85A DNA免疫组[（238．43±258．90）pg/ml）]高于生理盐水组[（0±0） pg/ml]、50μg Ag85A DNA组[（83．14±135．08） pg/ml]和100μg Ag85A DNA组[（163．83±207．13） pg/ml]，但各组之间差异均无统计学意义（t值分别为1．4970、0．9750、0．4684，P值分别为0．1442、0．3369、0．6427）；全血单个核细胞内Th1/Th2细胞比值：混合Ag85A DNA免疫组（4．67±5．05）显著高于生理盐水组（0．77±0．19）、50μg Ag85A DNA组（1．23±0．74）和100μg Ag85A DNA组（0．51±0．49）（t值分别为3．199、2．971、3．610，P值分别为0．0033、0．0059、0．0011）；肌肉电转染部位Ag85A DNA含量各组之间差异均无统计学意义。第2次免疫后，50μg Ag85A DNA组、100μg Ag85A DNA组和混合Ag85A DNA免疫组血清抗Ag85A特异性IgG抗体均比第1次免疫后显著升高（F＝7．17，P＝0．0111），但3组之间差异无统计学意义。第3次免疫后，100μg Ag85A DNA组和混合Ag85A DNA免疫组血清抗Ag85A特异性IgG抗体比第2次免疫后略有升高，而50μg Ag85 A DNA组略有降低，但3组之间差异无统计学意义。结论电转染可以使低剂量的DNA 疫苗产生较好的免疫效果，低、高剂量混合免疫是DNA疫苗肌肉注射加电转染免疫的最佳方案。