mcr-1及pmrAB介导临床分离大肠埃希菌对粘菌素耐药的机制研究

目的 探究临床分离大肠埃希菌对粘菌素的耐药机制.方法 收集商丘市第一人民医院2010—2017年临床分离的1988株大肠埃希菌,通过琼脂稀释法筛选粘菌素耐药大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法检测包括粘菌素在内的9种临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).PCR检测和测序分析与粘菌素耐药相关基因mcr-1和pmrAB.接合转移试验验证携带mcr-1耐药基因质粒的转移性.S1-PFGE及Southern blot对携带mcr-1耐药基因质粒的菌株进行定位分析.多位点序列分型(MLST)检测粘菌素耐药大肠埃希菌的序列型(ST).结果 通过琼脂稀释法筛选共计获得6株粘菌素耐药大肠埃希菌.药敏试验分析显示,6株菌均表现为多重耐药表型.通过PCR检测与测序分析显示,6株菌中有4株菌携带mcr-1,其余两株菌中存在pmrB基因突变导致的氨基酸替换(L167P).接合转移试验、S1-PFGE及Southern blot杂交分析显示,4株mcr-1阳性大肠埃希菌的质粒位于大小约为60 kb可接合性质粒上.MLST分析显示6株菌间存在6种不同的ST型.结论 本研究中mcr-1及pmrAB基因的突变是介导大肠埃希菌对粘菌素耐药性产生的主要机制.临床中须进一步监测粘菌素耐药大肠埃希菌的产生与传播,合理使用抗菌药物,防止粘菌素耐药菌株的扩散.