人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

[目的]探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制.[方法]人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2～5代细胞进行实验.采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化.[结果]体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μ mol/L人参皂苷Rbl作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义(P＞0.05),黑素含量呈浓度依赖性增加(与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4％±5.7％、155.7％±6.3％、217.2％±11.7％),酪氨酸酶活性增加(相对酪氨酸酶活性分别为117.9％±5.7％、158.2％±9.6％、182.6％±10.0％).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶(225.4％±12.8％)、MITF(313.5％±16.7％)蛋白表达明显升高(与溶剂对照组相比,P值均＜ 0.01),CREB磷酸化明显增加(322.5％±21.1％)(与溶剂对照组相比,P＜ 0.01).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用黑素细胞8h,MITF蛋白表达无明显变化；作用24h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P＜ 0.01.10 μmol/L的蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rbl引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均＜ 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加.[结论]人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性.PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制.