心脏干细胞生长微环境及其体外生物学特性

目的 研究在体外培养心肌组织过程中,心脏干细胞生长的微环境及其生物学特性.方法 8周龄SD大鼠,心肌组织切碎后依次用胰酶和胶原酶消化,收集组织块培养,待新生细胞铺满容器底时传代.取第3代干细胞行免疫荧光染色检测相关分子标志物的表达.培养基中加入EdU标记的增殖细胞后,培养的组织行HE染色、Masson染色、免疫荧光染色及TUNEL细胞凋亡检测.结果 心肌组织培养7～10天后有明亮的圆形细胞长出,其在体外培养过程中具有自动分化倾向.免疫荧光检测示:分裂象细胞c-kit阳性;多数细胞o-sarcomeric actin、cardiac troponin T、flk-1、vemintin阳性;部分细胞α-smooth muscle actin、connexin-43、CD31、CD45阳性,CD90阴性.培养的组织块切片后染色见大量新生细胞生长的同时伴随心肌细胞的凋亡,心肌间胶原纤维重塑;增殖期细胞EdU染色阳性;MMP-2、MMP-9及TGF-β1在心肌组织表达丰富,而在增殖细胞则较少表达.结论 心肌组织体外培养可便捷获取心脏干细胞,心脏干细胞的生长、增殖过程伴随细胞外基质的降解,其在体外培养过程中有自动分化倾向.